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猴核移植技术难度高

时间:2018-01-25 15:24来源:未知 作者:张雪
10秒内取出一个猴子卵母细胞核,整个过程需要极其快速精确,因为这个过程对卵母细胞损伤很大,如果细胞有损伤,后续的工作便无法进行。...

  卵母细胞的去核操作我们先从小鼠实验开始,把小鼠的卵母细胞固定住,用很细的针把核去除掉,这项工作比较容易操作。但是换成猴子的卵母细胞就并非易事了,由于猴子细胞不透明,在显微镜下看不到细胞核,需要通过偏振光才能把细胞核显示出来,经过长时间的训练,团队成员刘真博士已经做到10秒内取出一个猴子卵母细胞核,整个过程需要极其快速精确,因为这个过程对卵母细胞损伤很大,如果细胞有损伤,后续的工作便无法进行。

  除了去核要求速度快外,注入细胞同样要求非常快,我们的团队成员可以做到15秒内实现体细胞注入操作,只有精湛的技术才可以保证对卵母细胞损伤最小,另外体外时间越短损伤也越小。

  

  体细胞克隆过程中另一个难点是克隆体的囊胚发育状态比较差,对比小鼠和猪,猴的囊胚发育率比较低。优质胚胎才能发育成个体,只有内细胞团发育好才能成为优质胚胎。有时我们会遇到在克隆胚胎中看不到内细胞团,那么这个问题该怎么解决?

  从重构胚胎到克隆胚胎,第一步是要激活,这就涉及到激活条件及培养条件。我们选用了离子霉素+6-DMAP的激活条件,发现克隆体囊胚率是13%,但是优质的囊胚一个都没有,优质率为0。

  后来我们发现在小鼠上有一种组蛋白乙酰化酶抑制剂TSA,可以调控组蛋白的表观遗传状态。组蛋白乙酰化酶抑制剂处理后,囊胚率提高到16%,而且优质胚胎也增加了,但是还不太理想。2014年一篇文章报道用H3K9me3去甲基化酶Kdm4处理后,对小狗有很好的效果,我们尝试采用后发现效果很好,囊胚率升到45%,优质胚胎率升高到29%。

  工作到了这里有了明显的进展,也就是从这个时候,为了保持实验的连贯性,团队的成员取消了休假,甚至过年也没有真正的休息过。


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(责任编辑:张雪)

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